SDS-PAGE

SDS-PAGE elektroforéza v polyakrylamidovém gelu v přítomnosti dodecylsíranu sodného, je technika užíváná v biochemii, genetice, imunologii, mikrobiologii a molekulární biologii k separací proteinů na základě jejich elektroforetické pohyblivosti (ta závísí na délce polypeptidového řetězce, molekulární hmotnosti, stupni rozbalení (denaturaci) proteinu, posttranslatické modifikaci a dalších faktorech).

[editovat] Postup

Roztok proteinu, který má být analyzován, je nedříve smíchán s SDS, který protein denaturuje a učiní ho vzhledem k jeho molekulární hmotnosti záporně nabitým.

[editovat] Elektroforéza a ustálení

Denaturované proteiny jsou laboratorní injekční stříkačkou vloženy do jamek polyakrylamidové gelu, které jsou vyplněné vhodným pufrem. Následně je do gelu vpuštěn elektrický proud, díky kterému záporně nabité proteiny migrují skrz gel směrem k anodě. Na základě jejich velikosti se každý protein pohybuje skrz gel s rozdílnou rychlostí; menší proteiny pronikají póry v gelu snadněji než větší, které se střetávají s větším odporem. Po nějakém čase (obvykle několika hodinách, doba probíhání elektroforézy závisí na velikosti proudu, který gelem prochází) jsou proteiny na základě své molekulové hmotnosti rozdělené. Menší proteiny postoupí dále než větší, které jsou blíže počátku, kam byly proteiny aplikovány. V této fázi je několik možností, jak dále postupovat; lze aplikovat Coomassie blue, látku, která se na proteiny naváže a posléze je po odbarvení zviditelní nebo použít další metody ke zpracování proteinů (např. Western blot). Po obarvení rozdělených proteinů můžeme zjistit jejich molekulární hmotnost porovnáním s tzv. „markerem“, což je protein o známé molární hmotnosti.